Gram Boyama Nasıl yapılır?

Konusu 'Biyoloji' forumundadır ve Chanyeol tarafından 13 Temmuz 2016 başlatılmıştır.

  1. Chanyeol

    Chanyeol Süper moderatör Yönetici

    Gram Boyama

    Gram Boyama, bakterilerin mikroskobik özelliklerin incelenmesinde en sık kullanılan yöntemdir. Bakterilerin şekilleri, büyüklükleri, dizilişleri ve yapısı boyanarak belirlenebilir. Bakterideki mikroorganizmaların sınıflandırılmasında ve tanımlanmasında uygulanan en başarılı yöntemdir. Bu yöntem ilk olarak Hans Christian Joachim Gram tarafından uygulanmıştır. Bakterilerdeki duvar yapısının farklı olmasından dolayı bakteriler iki gruba ayrılır. Bunlar gram pozitif ve gram negatif bakterilerdir. Boyuma işlemi esnasında gram pozitif bakteriler mor rengine, gram negatif bakteriler ise kırmızıya yakın pembe rengine boyanır. Gram boyama yöntemi ile mikroorganizmaların morfolojisi ve dizilimi baz alınarak ön tanı konur. Buna bağlı olarak daha uygun bir antibiyotik seçilir ve izolasyon için besiyer seçimi yapılır. Gram boyama mikroorganizmanın anaerop olup olmadığını anlamaya yardımcı olur.

    Gram Boyama Nasıl Yapılır ?
    Preparat hazırlama işlemi ile başlanır. Preparatlar doğrudan hasta örneklerinden, kültürlerden hazırlanır. Kültür katı veya sıvı olabilir. Sıvı kültür kullanılacaksa tüp önce çalkalanmalıdır. Katı kültür kullanılacaksa da serum fizyolojik veya distile su kullanılabilir. Doğrudan hastadan alınan örneklerde önce ekim işlemi yapıldıktan sonra eğer materyal sıvı ise santrifüj edilir. Eğer örnek doku parçası kullanılacaksa enfeksiyon kapılmaması için doku steril olarak kesilir ve dokunun orta kısmından preparat hazırlanır. Aerop mikroorganizmalar da ise doku homojen hale getirildikten sonra küçük parçalara ayırma ile yapılabilir. Tüm bu işlemlerden sonra preparat hazırlanabilir.Preparat önce yayılır sonra kurutulur ve en sonrada tespit edilir. Preparatın üzerine kristal viyole boya çözeltisi dökülerek kaplanır. Yaklaşık olarak 1 dakika kadar beklenir. Preparat bol suyla yıkanır. Preparatın üzerine lugol çözeltisi dökülerek kaplanır. Yaklaşık olarak 1 dakika kadar beklenir ve yeniden preparat bol suyla yıkanır. Preparatın üzerine %95 oranında etanol eklenerek 10-15 saniye civarında beklenir. Preparat bol suyla yıkanır. Preparatın üzerine kristal safranın boya çözeltisi dökülerek 30 saniye kadar beklenir.Preparat bol suyla yıkanır. Preparat kurutma kağıdı ile yada doğal olarak havada bırakılarak kurutulur. Daha sonra mikroskopta incelenir. İnceleme sonucunda görülen mor renkler gram pozitif bakteriler, kırmızıya yakın pembe renktekiler ise gram negatif bakterilerdir.

    Gram Boyamaya Mikroorganizmaların Etkisi

    Gram pozitif bakterilerin hücre çeperlerinde gram negatiflere oranla oldukça kalın bir tabaka bulunur. Bu nedenle aldıkları boyayı gram negatiflere göre daha geç bırakırlar. Hücre çeperinde gram pozitif bakterilerde karbonhidratlar, gram negatifler bakterilerde ise lipidler fazladır. Karbonhidratlar alkolle karıştırıldığında hücre çeperindeki porlar daralır ve boyanın dışarı çıkması engellenir. Lipitlerde ise alkol çözücü olduğu için hücre çeperindeki porlar daha çok açılır. Ayrıca gram pozitif hücre çeperinde magnezyum da bulunur. Magnezyumun gram boyanmada önemli fonksiyonları vardır. Genel olarak yaşlı kültürden elde edilen preparat gramla boyama tekniğine daha eğilimlidir. Gram boyamada kullanılan değişik boya çözeltileri bulunur. Bu boyaların hazırlanan çözelti süreleri boyama süresini de değiştirir. kullanılmaktadır.